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為保證吸光度測(cè)定的準(zhǔn)確性,《中國(guó)藥典》對(duì)吸光度的測(cè)定有以下一些要求。
1.對(duì)溶劑的要求 供試品的吸光度通常是配成溶液后測(cè)定。所用溶劑除能充分溶解樣品、與樣品無(wú)相互作用、揮發(fā)性小外,在測(cè)定波長(zhǎng)處的吸光度也應(yīng)符合要求。
2.空白對(duì)照校正 吸光度的測(cè)定實(shí)際上是透光率的測(cè)定,透過(guò)光強(qiáng)度的減弱不僅是供試品溶液的吸收所致,還與溶劑和容器的吸收等因素有關(guān)。因此測(cè)定吸光度時(shí),均應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照進(jìn)行校正,以扣除這些因素的影響。
3.測(cè)定波長(zhǎng)的檢查 為保障測(cè)定的可靠性和準(zhǔn)確性、減少測(cè)定誤差,吸光度的測(cè)定一般在最大吸收波長(zhǎng)(Amax)處進(jìn)行。測(cè)定時(shí),為了核對(duì)供試品溶液吸收峰的位置是否正確,除另有規(guī)定外,應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照,用1em的石英吸收池,在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)4-2nm以?xún)?nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸光度,或由儀器在規(guī)定的波長(zhǎng)附近自動(dòng)掃描測(cè)定,以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)位置是否正確。
4.供試品溶液的濃度 供試品溶液濃度的選擇,應(yīng)使吸光度讀數(shù)在0.3~0.7之間為宜。因?yàn)?,在此范圍?nèi)吸光度測(cè)定的相對(duì)誤差較小。應(yīng)根據(jù)吸光度的范圍要求和藥物的吸收系數(shù),將供試品溶液配制為適宜的濃度。
5.儀器狹縫寬度的選擇
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